ELISA測(cè)定現(xiàn)通常為采用手工操作的以微孔板條為固相的測(cè)定模式，測(cè)定操作非常簡(jiǎn)單，一般涉及到標(biāo)本的收集保存、試劑準(zhǔn)備、加樣、溫育、大鼠ELISA試劑盒洗板、顯色、比色、結(jié)果判斷和結(jié)果報(bào)告及解釋等方面，其中任一步驟的不當(dāng)都會(huì)影響測(cè)定結(jié)果，且尤以加樣、溫育和洗板等步驟為甚。
盡管ELISA測(cè)定的操作步驟非常簡(jiǎn)單，但有可能會(huì)影響測(cè)定結(jié)果的因素卻較多，分布在測(cè)定操作的各步之中，尤以加樣、溫育和洗板為甚。為幫助大家分析查找測(cè)定中出現(xiàn)問(wèn)題的可能原因，特對(duì)常見問(wèn)題及原因歸納總結(jié)于下表。ELISA測(cè)定中可能會(huì)出現(xiàn)的問(wèn)題及可能的原因問(wèn)題可能的原因（非試劑盒本身的原因）
1．弱陽(yáng)性質(zhì)控樣本檢測(cè)不出 溫育的時(shí)間或溫度不夠；顯色反應(yīng)時(shí)間太短；所用配制緩沖液的蒸餾水有問(wèn)題
2．大鼠ELISA試劑盒測(cè)定的重復(fù)性差 （相同樣本兩次測(cè)定結(jié)果不一致） 這是典型的由測(cè)定操作引起的問(wèn)題，包括
（1）加樣本及試劑量不準(zhǔn)；孔間不一致；（2）加樣過(guò)快，孔間發(fā)生污染；