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    噬菌體效價測定法

    發(fā)布時間: 2012-10-10  點(diǎn)擊次數(shù): 2080次

     


    雙層瓊脂培養(yǎng)法
    1. 將之寄主細(xì)菌以液體培養(yǎng)法于適當(dāng)溫度下培養(yǎng),一般培養(yǎng)16~24小時.
    2. 以1% peptone為稀釋液,將噬菌體原液做10倍序列稀釋,一般稀釋至107倍即可.
    3. 取噬菌體稀釋液100 μl 與寄主菌液300 μl均勻混合,靜置15分鐘使其感染.
    4. 將上述混合液加入5 ml 冷卻至45℃的0.7﹪瓊脂培養(yǎng)基中,均勻混合后立即平鋪于已凝固的1.8﹪瓊脂培養(yǎng)基上.
    5. 將平板置于適合的溫度下,一般培養(yǎng)8~24小時,待溶菌斑產(chǎn)生后觀察并計(jì)算其數(shù)目.
    6. 噬菌體效價(pfu/ml)=溶菌斑數(shù)×稀釋倍數(shù)×取樣量折算數(shù)
       例如:噬菌體原液稀釋倍數(shù)為107,取樣量測定量為0.1ml (則取樣量折算數(shù)為10),三個平板的溶菌斑數(shù)目分別為275、252、263,則噬菌體原液的效價為:1/3(275+252+263)×107×10=2.63×1010 (pfu/ml)

    點(diǎn)滴法
    1. 將之寄主細(xì)菌以液體培養(yǎng)法于適當(dāng)溫度下培養(yǎng),一般培養(yǎng)16~24小時.
    2. 取300 μl寄主細(xì)菌懸浮液加入5 ml冷卻至45℃的0.7﹪瓊脂培養(yǎng)基中,均勻混合后立即平鋪于已凝固的1.8﹪瓊脂培養(yǎng)基上,并靜置30分鐘以上使其凝固.
    3. 以1% peptone為稀釋液,將噬菌體原液做10倍序列稀釋,一般稀釋至107倍即可.
    4. 將平板劃分為八個區(qū)域,以pipetman取不同稀釋倍數(shù)之噬菌體稀釋液各1 μl,分別接種于不同的區(qū)域上.
    5. 將平板置于適合的溫度下,一般培養(yǎng)8~24小時,待溶菌斑產(chǎn)生后觀察并計(jì)算其數(shù)目.一般噬菌體濃度太高的區(qū)域會融合成一個大的溶菌斑,而濃度適中的區(qū)域會形成肉眼可觀察的溶菌斑.
    6. 噬菌體效價 (pfu/ml)=溶菌斑數(shù)×稀釋倍數(shù)×取樣量折算數(shù)
       例如:噬菌體原液稀釋倍數(shù)為106,取樣測定量為0.001 ml (則取樣量折算數(shù)為1000),三個滴定點(diǎn)的溶菌斑數(shù)目分別為15、18、16,則噬菌體原液的效價為:1/3(15+18+16)×106×1000=1.63×1010 (pfu/ml)
     
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